@MASTERSTHESIS{ 2012:250662155,
 	title = {Estudos Bioquímicos de proteases extracelulares e expressão de seus genes de isolados de Trichoderma spp. após crescimento em parede celular de Rhizoctonia solani},
 	year = {2012},
 	url = "http://www.bdtd.ueg.br/handle/tede/623",
 	abstract = "Espécies  de Trichodermatem  sido  estudadas  principalmente  pelo  seu  reconhecido  papel  no controle biológico de diversos fitopatógenos, sendo que proteases, glucanases e quitinases estão intrinsecamente  envolvidas  nesse  processo.  Esse  trabalho  objetivou  o  estudo bioquímico  de proteases  extracelulares  de Trichodermavirens(301/01), Trichoderma  harzianum  (494/02  e ALL  42)e Trichoderma  asperellum  (T00) secretadas  quando  expostas  a  parede  celular  de Rhizoctonia  solani  (PCRS)e  analisada  a  expressão  dos  genes  de  proteases,  glucanases  e quitinases  frente  à  PCRS tendo  como  controle a indução  em glicose.  A atividade  especifica de proteases de T harzianum foi baixa em comparação a Tvirens eT asperellum, demonstrando a alta capacidade  de  micoparasitismo  dessa  espécie, jáque  no  confronto  em placa  de petri  todos os  isolados  foram  efetivos  contra R.  solani.  Foi  utilizada  a Cromatografia  de  afinidade  com bacitracina para obtenção dos extratos de proteases, sendo observados perfis diferenciados para os  isolados  e  para  pHs  5,0e  8,0.  Foi  avaliada  a  influência  de  inibidores  e  detergentes  na atividade   enzimática   no   extrato   de   proteases,   PMSF   e   EDTA   inibiram   os   extratos   em aproximadamente  20%,  Triton  X-100  e  SDS  inibiram  em  até  25%.  A  ação  de  cátions  di  e monovalentes  foi  avaliadarevelando  um  aumento  na  atividade  enzimática  em  ate  40%  e  uma dinimuição  de 20% respectivamente.  Avaliou-se a  afinidade  dos  extratos  de  proteases  em  dois substratos, albumina e azocaseína. A afinidade pela albumina foi baixa em relação a azocazeína para  todos  os  isolados.  Em  relação  a  temperatura  e  pH  ótimo  verificou-se  que  os  extratos apresentaram  temperatura  ótima  em  50°C  e  pH  ótimo  a  8,0. Para  avaliar  o  perfil  de  proteases dos isolados foi realizada uma cromatografia em gel de poliacrilamida SDS-PAGE. Para avaliar a  atividade  de  proteases  em  gel  de  poliacrilamida, ascondiçõesforamnãodesnaturantes (zimograma).A análise  da  expressão  dos  genes  de proteases  foi analisada pela técnica  de RT-PCR nos isolados 494/02 e ALL 42 nos tempos de 6, 12, 24 e 48 horas, demonstrando um perfil variando  na  expressão  das  proteases  trypsin-like,  aspartato  protease  e  serino  protease.  Para analisar a relação da expressão dos genes de proteases e relação à expressão de genes de outras enzimas também  envolvidas  no  micoparasitismo, foi  analisada  a  expressão  dos  genes  de β 1-3 endoglicanase, quitinase 42 kD e N-Acetilglicosaminidase (Nagase) frente a PCRS. O isolado T.harzianum(ALL  42)  manteve  melhor  perfil  de  expressão  de  aspartato  proteases  e  de β  1-3 endoglicanase,  quitinase  42  kD  e  N-Acetilglicosaminidase  (Nagase).  O  coeficiente  de  Pearson foi  calculado  para  correlação  entre  glucanases,  quitinases  e  proteases,  correlações  positivas foram  observadas  para  o  isolado  ALL  42  para  aspartato  protease  e  β  1-3  endoglicanase, quitinase  42  kD  e  N-Acetilglicosaminidase  (Nagase),  enquanto  que  494/02  não  demonstrou correlação positiva para aspartato protease.",
 	publisher = {Universidade Estadual de Goiás},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação Stricto sensu em Ciências Moleculares},
 	note = {UEG ::Coordenação de Mestrado Ciências Moleculares}
}